X射線三維顯微鏡攝影使得很大數目的顯微鏡在較短時間內涵一個很小的標本區域內進行,在某種水平上就大概束了每一片格的暴光時間;既使在進行縮時拍攝時,也因思量到活體細小生物或活體細胞處于接續地行動狀況,因此在顯微鏡中暴光時間的很大的解放度在這里就不存在了。活體生物行動的另一個結果是的聚焦平面也是時常更改的,既即是活體生物自己(例如細菌或游離細胞)偶然乃至能夠挪動到視場以外,因此在尼康顯微鏡影戲拍攝時代應該對物體平面上的聚焦接續地進行調治,而且密切監督被拍攝的活體對象,使它時常處于視場的中心。這種聚焦和監督是通過攝影機上的一個具備半反射棱鏡的聚焦目鏡來進行的.
由于思量到在X射線三維顯微鏡攝影中很短的暴光時間,顯微鏡在聚焦目鏡中應用使光進行不對稱漫衍的分外棱鏡,70%的光用于攝影,30%的光用于聚焦和監督。用于顯微鏡的光源大多數是氣體放電燈(高壓汞燈或氮燈),除了很低的放大倍數以外,在許多情況下特別是應用相差技術時,白熾燈不能夠產生充足的亮光度以保證顯微攝影所必需的很短的暴光時間。在曝光時間的控制中應該留意到,與攝影速率相聯系的暴光時間不會隨攝影機速率而變更,惟有在照明中留有充足的余地,在應用不同感光速率的膠片質料和中密度濾片刻,才氣到達的暴光。在顯微鏡攝影中,由于進行短時間的暴光,使高速攝影機的應用也受到必然的大概束。若以64格/秒的速率拍攝,在一分鐘內就能夠拍攝30m膠片,在此時代大概不少于4,000個片格應該被暴光。既應用18--'24格/秒的普通速率(相當于普通影戲的放映速率),暴光時間也不能夠低于1/50s,因為從一個格移到另一格的時間也務必計較在內,在此時代攝影機的快門務必封閉。
在科學鉆研中所應用的X射線三維顯微鏡影戲膠片普通為16毫米的膠片,這種膠片圖像的尺寸為7.5x10.4毫米,每米長度具備130格。而每米具備52格的35毫米的膠片在顯微鏡中是不常應用的,這不僅由于它的圖像面積(16x22毫米)是16毫米膠片的4.5倍,從而減小了圖像平面上的光密度,而且在經濟上也是很不合算的。當今在另有一種超一8膠.片已被用于顯微鏡攝影,它的圖像尺寸為4.2x5.7毫米,這種膠片的一個大的好處是與16毫米膠片相比費用更低,固然它不適于為大量的觀眾放映,但在科學鉆研中或是有較大的代價。